【求助】TEV酶切效率太低了
发布于 2014-08-31 · 浏览 3559 · IP 陕西陕西
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本试验为用TEV酶对融合蛋白进行酶切。
融合蛋白=标签蛋白-TEV酶切位点-目标蛋白。标签蛋白是MBP，麦芽糖结合蛋白。TEV酶是自己表达的。
目前遇到的问题是：TEV酶对融合蛋白酶切效率较低，酶切不完全。
具体情况是这样的，如下图：
1.Marker
2.融合蛋白
3.融合蛋白+TEV酶（酶切后上清）
4.融合蛋白+TEV酶（酶切后沉淀）
5-12 基本同3-4，只不过每组实验中融合蛋白和TEV酶的比例不一样。
酶的贮存和反应都是按照标准buffer来进行的。目的蛋白切下来的太少了。
后来优化过酶切反应体系、酶切温度（4度、20度、30度）、酶切时间（2h-24h），结果基本都会如图这个样子。
拜托大家给看看这是怎么回事啊，求高人指点！
融合蛋白=标签蛋白-TEV酶切位点-目标蛋白。标签蛋白是MBP，麦芽糖结合蛋白。TEV酶是自己表达的。
目前遇到的问题是：TEV酶对融合蛋白酶切效率较低，酶切不完全。
具体情况是这样的，如下图：
1.Marker
2.融合蛋白
3.融合蛋白+TEV酶（酶切后上清）
4.融合蛋白+TEV酶（酶切后沉淀）
5-12 基本同3-4，只不过每组实验中融合蛋白和TEV酶的比例不一样。
酶的贮存和反应都是按照标准buffer来进行的。目的蛋白切下来的太少了。
后来优化过酶切反应体系、酶切温度（4度、20度、30度）、酶切时间（2h-24h），结果基本都会如图这个样子。
拜托大家给看看这是怎么回事啊，求高人指点！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3559
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