【求助】质粒转化，提取和酶切鉴定

需要重新使用质粒包埋病毒，但是没法确定质粒是否可用，求助各位，293细胞长了一代又一代了~具体过程：
实验室保存质粒（1.2ug/ul，5ul左右)5年，质粒大小约10000bp, 现重新进行质粒转化，发现转化效率极低，平板中只有一个克隆。
取克隆小摇后，双酶切鉴定，测序鉴定，带教boss认为可以进行大瑶提取质粒。
因等待试剂，耽搁半月，因此50%甘油保存在了-80℃。
现重新大摇菌液，再次酶切鉴定，电泳仅见一条分子量大的一条带，欲哭无泪~
带教boss生宝宝去了，请问各位问题可能出在哪里，如何解决好？感激涕零~