【求助】His标签蛋白纯化
发布于 2014-06-30 · 浏览 796 · IP 北京北京
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各位大神，请教一个问题，小妹最近做蛋白表达，带有His标签，欲用镍柱纯化。发现不挂柱，具体情况如下：
目的蛋白核酸序列连接在pET28载体上，目的蛋白两端连有his标签，N端有MBP（增加蛋白可溶性），用Ni柱进行纯化，上样缓冲液为pH7.4的PBS，洗脱缓冲液为含咪唑的pH7.4PBS。电泳显示蛋白不挂柱，在流穿液中。用脲将蛋白进行变性后纯化，结果依旧。通过WB检测证实his标签的存在。
各位大神帮帮忙：）
目的蛋白核酸序列连接在pET28载体上，目的蛋白两端连有his标签，N端有MBP（增加蛋白可溶性），用Ni柱进行纯化，上样缓冲液为pH7.4的PBS，洗脱缓冲液为含咪唑的pH7.4PBS。电泳显示蛋白不挂柱，在流穿液中。用脲将蛋白进行变性后纯化，结果依旧。通过WB检测证实his标签的存在。
各位大神帮帮忙：）
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 796
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