【求助】免疫组化鉴定血管平滑肌细胞

做大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养，利用anti-SMA进行免疫组化鉴定，最后DAB显色后，发现染色不均匀，有的细胞是很深的棕色，有的颜色很浅，但是还是看得到肌丝。阴性对照（一抗那一步以1%BSA代替）则看不到任何显色，请做过的朋友看看这个显色很浅的细胞是不是阳性的，如何解决这种显色不均匀的现象。

100倍的，可以看到染色有深有浅

250倍，可以看到染色浅的细胞还是能看到肌丝

这是阴性对照（1%BSA代替一抗）

试验步骤：
弃培养基，PBS洗2次；
4%多聚甲醛室温固定20min；
PBS洗3次；
5%BSA封闭20min；
弃上清，加一抗，4度过夜；
PBS洗3次；
2抗，37度20min；
PBS洗3次；
SABC 37度 20min；
PBS洗4次；
DAB显色