【求助】：为什么我设计有酶切位点的引物PCR目的片断测序后没有引入酶切位点啊，困惑？？
发布于 2005-01-04 · 浏览 3899 · IP 北京北京
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我的模板是克隆在T-EASY(PROMEGA)中的880bp的一段序列，
然后我设计带有酶切位点的一对引物（各带一个酶切位点），
目的是通过PCR导入这880bp序列中这两个酶切位点，然后进行双酶切构建载体；
但是测序后发现，序列下游的酶切位点没有引入，其余的序列都正确，怎么回事啊，就是少了酶切位点和几个保护性碱基，（总共12个碱基）大家指点一下！！
是引物设计问题还是测序问题呢，我的引物是在上海生工合成的，以前一直用，没问题的啊
然后我设计带有酶切位点的一对引物（各带一个酶切位点），
目的是通过PCR导入这880bp序列中这两个酶切位点，然后进行双酶切构建载体；
但是测序后发现，序列下游的酶切位点没有引入，其余的序列都正确，怎么回事啊，就是少了酶切位点和几个保护性碱基，（总共12个碱基）大家指点一下！！
是引物设计问题还是测序问题呢，我的引物是在上海生工合成的，以前一直用，没问题的啊
最后编辑于 2005-01-04 · 浏览 3899
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