【求助】蛋白纯化的时候，蛋白跟镍柱总是结合不牢，一洗就掉了
发布于 2012-11-12 · 浏览 6047 · IP 江苏江苏
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各位兄弟姐妹，老师同仁，小妹在这有一个问题一直困扰许久，想问问大家该如何处置好。我纯化一个连了GFP的蛋白，载体是28a 在BL21中进行表达，蛋白表达基本都在上清液，但是纯化的时候，不知何故，蛋白跟镍柱总是结合不住，用20mM的咪唑一洗 就基本都掉下来了。我们一般是用20mM咪唑先平衡柱子，然后上样，上完样之后再用20mM平衡，平衡好之后就用50，100，250mM的咪唑依次来洗脱，一般在100，250mM的咪唑洗下来的蛋白才算比较纯的。可是我这个蛋白在20mM的时候就基本被洗下来了，我觉得就是蛋白跟镍柱没结合住。后来我把蛋白跟镍柱在4度，结合了一个小时之后再直接洗脱，但是结果还是不行，虽然比直接上样好一点，但依然在20mM的时候就洗掉了很多，后面陆陆续续的用50，100洗，就基本就下来了。现在真不知道该怎么办才好了，请各位大神指教！！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 6047
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