【求助】为什么开始表达得很好的蛋白突然就不表达了？

我用的是pet-22b表达载体，在BL21(DE3)里表达，刚刚构建好转到表达宿主进行初步表达的时候，什么条件都没有优化，直接把验证正确的转化子接种到LB培养基后用1mM的IPTG诱导，37度，200转发酵过夜后，用发酵液离心取上清直接测酶活，表达得很好，结果刚拿了两批数据，后面就再也做不了啦。先是不再分泌到胞外，破胞效果也不好，后面干脆连破胞都没有活力了，晕死。
后来做了以下工作：
1、对每次的接种菌液和发酵后的菌液拿来涂布抗性板，提质粒，转点显色平板，都证明重组子没有丢失，显色上随机挑的单菌落也都产有很明显很大的透明圈。说明在平板上是有表达的。
2、优化不同的IPTG诱导浓度和培养温度。现在IPTG终浓度降到了0.08mM，在25度才有表达，可是表达量很低，用发酵后的菌体跑了蛋白胶根本看不出明显的目的蛋白。

各位战友帮忙分析一下这到底是怎么回事呢？焦头烂额中。。。。。。
小女子感激不尽