【求助】关于细胞提蛋白做westblot的问题

我培养原代贴壁细胞，现在有几个问题请教大家：

1.25的培养瓶中培养细胞，收集细胞有两种方法：第一种方法是倒掉培养液，冷的PBS洗两次，然后直接加裂解液（应该加多少的裂解液，而且裂解完后用*头吹打，*头没有办法伸到培养瓶里，怎么办？）。第二种方法是倒掉培养液，用1ml的胰酶消化，然后倒掉胰酶，加冷的PBS吹打细胞，转移到EP管中，离心（离心速度和离心时间是多少，需要是4度温度吗，有时候发现上清液还有细胞，怎么办），弃上清液，加冷的PBS吹打细胞，离心，弃上清液。得到细胞。再加裂解液裂解。

2。12000g4度离心15分钟，得到上清液，在多少度保存，-20度还是-80度。

3。裂解液用的是fermentes的细胞裂解液，大家有用过吗？怎么样？