【求助】EMSA实验请教
发布于 2011-07-19 · 浏览 2162 · IP 天津天津
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大家好，最近做一个非放射性的EMSA，蛋白已经确知是核蛋白，PI值9.0左右，24nt的RNA, 理论上来说应该是结合的。
50mM HEPES pH7.0, 2.5mM EDTA, 5mM MgCl2,200mM Nacl, 0.5mM DTT, 20%甘油（5x）反应时候用的是1X的。
37度作用了半个小时。
TBE缓冲液下，在3%，8%，10%,15%,20%的聚丙烯酰胺胶中都跑过，但是发现free的RNA条带确实减弱了，但是似乎蛋白-RNA的复合物总是堵在上样孔里，跑胶的电压80，100都试过，跑胶的时间也从0.5-5小时都试过，总是这个结果，百思不得其解，想请版上的各位达人指点一下，感激不尽！
50mM HEPES pH7.0, 2.5mM EDTA, 5mM MgCl2,200mM Nacl, 0.5mM DTT, 20%甘油（5x）反应时候用的是1X的。
37度作用了半个小时。
TBE缓冲液下，在3%，8%，10%,15%,20%的聚丙烯酰胺胶中都跑过，但是发现free的RNA条带确实减弱了，但是似乎蛋白-RNA的复合物总是堵在上样孔里，跑胶的电压80，100都试过，跑胶的时间也从0.5-5小时都试过，总是这个结果，百思不得其解，想请版上的各位达人指点一下，感激不尽！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2162
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