【求助】2670bp pcr产物胶回收后T-Aclone ,转化细菌后（TOP10）蓝白斑筛选，白色菌落罕见
发布于 2011-01-19 · 浏览 2364 · IP 未知未知
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用的是Invitrogen的 TA cloning kit dual promoter(pCRii),反应体系是按照说明书的来的，我的insertion和vector的比大约在2.5:1左右，14度过夜反应。第二天由于下午铺板所以就把反应体系放入了-20度。 转化后结果如题。蓝色菌落也不是特别多，三个板一共有100个左右，白色菌落一共就只有四个。已经重复N遍。白色菌落挑菌培养提取质粒酶切鉴定后均无阳性克隆，用T7 primer做过几回测序，有几个是空质粒或者是质粒缺失一部分后的序列，大多是杂乱信号测不出来。
现在我怀疑1，我的条带太大了，连接效率大大降低
2，T载体不好
请问高手们：1。 我的怀疑有没有道理
2。 如果有道理，有没有一个方法能把我的条带顺利连到载体上（克隆载体即可，不需要表达）
现在我怀疑1，我的条带太大了，连接效率大大降低
2，T载体不好
请问高手们：1。 我的怀疑有没有道理
2。 如果有道理，有没有一个方法能把我的条带顺利连到载体上（克隆载体即可，不需要表达）
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2364
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