【求助】细菌单杂交文库构建
我按照发表在nature technology上的protocol 构建细菌单杂交文库。首先需要将pH3U3载体用NotI&AscI双切,再把随即片断克隆到这上面来。我在梅切这步就麻烦了,这个ph3u3是低拷贝数质粒,提的量总不理想。其次NotI&AscI双切后总是不干净,空载体一联接转化总会有很高的背景。请问高手们有无同样的经历?这两个酶怎么才能切干净?谢谢了
我按照发表在nature technology上的protocol 构建细菌单杂交文库。首先需要将pH3U3载体用NotI&AscI双切,再把随即片断克隆到这上面来。我在梅切这步就麻烦了,这个ph3u3是低拷贝数质粒,提的量总不理想。其次NotI&AscI双切后总是不干净,空载体一联接转化总会有很高的背景。请问高手们有无同样的经历?这两个酶怎么才能切干净?谢谢了