【求助】whole mount 标本免疫荧光的制作？？
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证书编号：
葛欣医生
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收录时间 2025年5月20日
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发布于 2009-10-28 · 浏览 5747 · IP 黑龙江黑龙江
这个帖子发布于 15 年零 208 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我是新手，最近在做大鼠肠管壁的NOS神经元。我的步骤如下：
1 组织取下后立即在4%多聚甲醛中低温固定过夜；
2 在解剖显微镜下去除粘膜层、粘膜下层和环肌层；保留肠肌神经丛和纵肌（即whole mount）;
3 PBS清洗后用10%血清（与二抗来源一致）、1%Triton X-100的PBS封闭30min；
4 PBS清洗后在anti-NOS一抗中孵育48h；
5 PBS清洗后在二抗中孵育1小时；
6 封片。
但是经数次试验均无结果，片子上苍白一片，无任何荧光，请问各位高手，我的问题出现在哪里？我用的抗体都是原装进口的！（老贵了）
急，多谢了。
1 组织取下后立即在4%多聚甲醛中低温固定过夜；
2 在解剖显微镜下去除粘膜层、粘膜下层和环肌层；保留肠肌神经丛和纵肌（即whole mount）;
3 PBS清洗后用10%血清（与二抗来源一致）、1%Triton X-100的PBS封闭30min；
4 PBS清洗后在anti-NOS一抗中孵育48h；
5 PBS清洗后在二抗中孵育1小时；
6 封片。
但是经数次试验均无结果，片子上苍白一片，无任何荧光，请问各位高手，我的问题出现在哪里？我用的抗体都是原装进口的！（老贵了）
急，多谢了。
最后编辑于 2009-10-28 · 浏览 5747
