石蜡标本制备

石蜡标本制备（骨组织）

一、SD大鼠尾椎

1、固定：SD大鼠尾椎标本离体后，PBS溶液冲洗，置于免疫组织固定液（4％多聚甲醛）中，4℃ 固定 48h。

2、脱钙：PBS溶液冲洗，置于 10％ EDTA脱钙液中（配制方法见 2 楼），室温脱钙。每 3 天 （或每 2 天）更换脱钙液 1 次，脱钙时间约为 7~8 周。观察骨标本表面颜色，并使用细针穿刺测定其脱钙程度，细针无阻力即可穿过标本表明脱钙完成。

• 脱钙液要充足，一般为标本体积的 20 倍[1]；
• 脱钙时将瓶口不要盖严，在通风处放置，缩短脱钙时间[1]。

3、修块：根据切片要求对组织块进行修整。

4、脱水透明：乙醇梯度脱水，二甲苯透明（骨组织时间较长）。标本可在 70% 乙醇溶液中保存较长时间，但一旦开始进行 80% 乙醇溶液脱水，需完成整个流程直至包埋。脱水时间不足，会导致标本不能充分透明，从而无法被石蜡充分浸润；而脱水时间过长，会导致标本太脆，切片时标本碎裂。

• 70%乙醇（70ml无水乙醇：30ml三蒸水）过夜
• 80%乙醇 2h
• 90%乙醇 2h
• 95%乙醇 2h
• 无水乙醇 5.5h（①2h+②2h+③1.5h）
• 二甲苯 2.5h（①1h+②1h+③0.5h）

5、制块：石蜡包埋。

• 包埋机提前 30 min 预热（70℃），检查蜡是否足够。
• 标本浸蜡 6h （可延长），需蜡中无杂质、标本无气泡。
• 使用模具包埋，若石蜡块中有裂、气泡、杂质，则需要融蜡重新包埋。
• 使用冰台可使蜡块快速降温成形。若不易脱模，则表明蜡块尚未凝固。降温过快，可导致蜡块有裂，需重新包埋后自然降温。

二、新西兰大白兔椎体[2]

1、固定：新西兰大白兔的椎体组织标本离体后，PBS溶液冲洗，置于10％甲醛固定液（体积分数）中，4℃固定 4d。

2、脱钙：PBS溶液冲洗，置于10％ EDTA-Tris缓冲液（体积分数）中，37.4℃ 脱钙 21d。每周更换脱钙液 1 次，换液时观察骨标本表面颜色并用物理法测定其脱钙程度。

3、脱水透明：脱钙完全后取材，梯度乙醇逐级脱水，二甲苯透明处理 2 h。

4、制块：石蜡包埋。

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参考文献

[1]吴拮,王栋,李静,赵成相.椎间盘组织冷冻切片制作技术的应用[J].医学信息,2021,34(14):172-174.

[2]韩超,马信龙,王涛,马剑雄,田鹏,臧加成.Modic改变动物模型的建立及其评估[J].中华骨科杂志,2014,34(04):478-486.