【实验方法】石蜡切片HE染色实验步骤

1. 样品处理

a) 对于石蜡切片：

二甲苯中脱蜡5-10分钟。

换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟；90%乙醇2分钟；70%乙醇2分钟；蒸馏水2分钟。

b) 对于冰冻切片：

蒸馏水2分钟。

c) 对于培养细胞：

用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。

2. 苏木素伊红(HE)染色

对于上述处理好的样品：

苏木素染色液染色5-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。浸自来水中冲洗去多余的染色液，约10分钟。蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。95%乙醇5秒。伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。

3. 脱水、透明、封片或进行其它染色

a) 脱水、透明、封片：

95%乙醇脱水2分钟。换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的

二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞核呈蓝色，而细胞浆呈粉红色或红色。

b) 进行其它染色：

如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在伊红染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。

注意事项：

1.        需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。

2.        如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。

3.        样品数量很多时，可以使用歌凡生产的染色架和染色缸，便于操作。 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。

4.        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。