【求助】请各位大虾帮忙分析下,MTT实验出现了数据与现象相反的结果---
请各位帮忙分析下---
在做活性(抑制肿瘤细胞)物质检测试验前,我做了一个预实验。
关于 细胞浓度梯度和 MTT反应结果线性关系的验证---
取对数期细胞,消化后加入一定量的培养基和血清,没有计数,混匀之后的浓度大约和实验室其他人平时做MTT时的浓度差不多--
以此悬液为材料,分别取0,10,20,40,50,60,80,100微升细胞悬液,
不足100微升的用PBS补足到100微升。培养24h,基本都贴壁---
加入20微升MTT,4h后翻板,加入DMSO150微升,震荡10min溶解---
这个时候从颜色上看基本正常,孔中的溶液呈紫色,不过不是很浓,但基本还是随细胞浓度单调升高--
以取0微升细胞的那组为空白对照,进行测定,发现60,80,100微升细胞组测定值全都是负的,而其他的组也不呈严格的线性关系。
不呈线性关系的可能是细胞吹的不够分散,但是令我非常奇怪的是:
60,80,100微升细胞孔中,蓝紫色很深了,明显比空白对照(也带点淡紫色)颜色深的多,OD492nm测定出来的却是负值,-0.174.
对于这一点,我百思不得其解,请各位大虾帮忙分析一下原因可能是在哪儿?
小生不胜感激---
最后编辑于 2009-06-08 · 浏览 1470