【求助】关于细菌基因组文库构建
这个帖子发布于 16 年零 243 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
在文献上看基因组文库构建好像很简单，道理也很明了，可是自己动手要开始做时，想想还是有很多问题：
1，对于gDNA的提取，方法已经确定，但是最终需要多少用量？（以铺板1万个克隆计算）
2，酶切部分消化gDNA，时间和酶的用量怎么定？是不是梯度到产生刚好符合我所要的片段大小较多的方案（质粒文库以10Kb下计）？
3，做连接时是不是只能10微升的体系为宜？如果是这样，那铺一个大的平板，就意味着一次同时做几个（比如3个）平行的连接？如果要几十个平板呢，是不是一次就做几十个连接，然后每一个板铺上好几管连接产物转化的宿主菌？
4，是先试探做一个板看看效果，还是一次都做了比较合理？
5，还有个小问题，酶切质粒和DNA插入片段酶切后割胶回收，用KIT做，能否根据浓度自行增加最终溶解DNA时的体积？
6，载体酶切后割胶回收用CIAP处理，还是在酶切后割胶回收之前处理，CIAP处理还要失活该酶吗？
问题很多，希望有经验的园友多多帮助，介绍点经验，少走弯路，谢谢！
1，对于gDNA的提取，方法已经确定，但是最终需要多少用量？（以铺板1万个克隆计算）
2，酶切部分消化gDNA，时间和酶的用量怎么定？是不是梯度到产生刚好符合我所要的片段大小较多的方案（质粒文库以10Kb下计）？
3，做连接时是不是只能10微升的体系为宜？如果是这样，那铺一个大的平板，就意味着一次同时做几个（比如3个）平行的连接？如果要几十个平板呢，是不是一次就做几十个连接，然后每一个板铺上好几管连接产物转化的宿主菌？
4，是先试探做一个板看看效果，还是一次都做了比较合理？
5，还有个小问题，酶切质粒和DNA插入片段酶切后割胶回收，用KIT做，能否根据浓度自行增加最终溶解DNA时的体积？
6，载体酶切后割胶回收用CIAP处理，还是在酶切后割胶回收之前处理，CIAP处理还要失活该酶吗？
问题很多，希望有经验的园友多多帮助，介绍点经验，少走弯路，谢谢！
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