【求助】酵母双杂交碰到了令人费解的疑难问题，请教各位大侠！
这个帖子发布于 16 年零 304 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
现做酵母双杂交出现了令自己费解的疑难问题，考虑再三，自认为不弄明白的话，就算重新也是徒劳，很可能重蹈覆辙，所以请教各位大侠！！！！
pGADT7-某抗体库 AH109 与 pGBKT7-X基因 Y187 杂交 ，经过三缺、四缺培养基筛选，随机挑选150个克隆检测蓝斑，竟然有133个显蓝色——假阳性是肯定的了！
问题在于同时我做了阴性对照，也就是pGADT7 AH109 与 pGBKT7-X基因 Y187 杂交后在SD/-Trp -Leu 平板上筛选，得到的克隆没有检测出蓝斑。可以证明pGBKT7-X基因 Y187 没有产生自激活。
然后我随机挑选了6个筛选到的阳性克隆，提取质粒，转化大肠杆菌DH5X，6个LB Amp+ 平板，只有一个转化成功，测序后发现是pGADT7空载体！！！！
附带说一句，未转化成功的克隆，将其酵母用酵母试剂盒提质粒后，电泳检测只看到很浓的RNA，没有任何质粒条带。还有就是四缺上的克隆都很小，直径不到1mm。
自我总结：
一方面自己从酵母提质粒的操作肯定有错误，但没提出质粒的话，怎么解释很浓的RNA条带？况且还提出了一个质粒，虽然最后证明是空载体。
另一方面，从四缺平板上筛选的能显蓝斑的阳性克隆，唯一提到的质粒经转化测序后竟然是pGADT7空载体，但上面阴性对照已证实不存在自激活可能。
对我这个小硕来说，现在情况很复杂，请各位大侠指点一下，不胜感激！
pGADT7-某抗体库 AH109 与 pGBKT7-X基因 Y187 杂交 ，经过三缺、四缺培养基筛选，随机挑选150个克隆检测蓝斑，竟然有133个显蓝色——假阳性是肯定的了！
问题在于同时我做了阴性对照，也就是pGADT7 AH109 与 pGBKT7-X基因 Y187 杂交后在SD/-Trp -Leu 平板上筛选，得到的克隆没有检测出蓝斑。可以证明pGBKT7-X基因 Y187 没有产生自激活。
然后我随机挑选了6个筛选到的阳性克隆，提取质粒，转化大肠杆菌DH5X，6个LB Amp+ 平板，只有一个转化成功，测序后发现是pGADT7空载体！！！！
附带说一句，未转化成功的克隆，将其酵母用酵母试剂盒提质粒后，电泳检测只看到很浓的RNA，没有任何质粒条带。还有就是四缺上的克隆都很小，直径不到1mm。
自我总结：
一方面自己从酵母提质粒的操作肯定有错误，但没提出质粒的话，怎么解释很浓的RNA条带？况且还提出了一个质粒，虽然最后证明是空载体。
另一方面，从四缺平板上筛选的能显蓝斑的阳性克隆，唯一提到的质粒经转化测序后竟然是pGADT7空载体，但上面阴性对照已证实不存在自激活可能。
对我这个小硕来说，现在情况很复杂，请各位大侠指点一下，不胜感激！
