【求助】NF-kB EMSA结果图（请战友们帮忙分析下）

最近做了EMSA，用的是PIERCE的试剂盒。主要是用LPS刺激分化的THP-1细胞半小时，激活NF-KB的入核以及同DNA序列的结合。
结果如图：
1. free biotin-probe
2—7为biotin-probe+核蛋白，其中2为正常THP-1细胞对照，３为LPS刺激３０分钟，４—7为LPS处理前加药组
８. biotin-probe+ LPS样（３） +　非标记probe
９. 试剂盒提供的EBNA参照
其中biotin标记的探针每孔上５０fmol，未标记的探针每孔１０pmol，核蛋白每孔２ug

做出来的结果主要有两个问题：
１. 我的探针是从英骏合成的单链，自己退火成双链的，２２个bp，５'端标记biotin。但是我的底部的自由探针跑的比试剂盒提供的EBNA DNA(25bp)快不少，怀疑是否退火效率低，实际上还都是单链的？如果是这种情况的话，那么转录因子会不会和单链DNA结合呢？
２. 我的shift条带形状好像和文献上的不一样，其他人做的LPS诱导的NF-KB入核好像都有p65/p50和p50/p50两个复合物结合DNA形成的２条带，我的会不会是非特异带呢？

麻烦各位战友帮忙分析一下 :)