EMSA,蛋白探针复合物在加样孔里跑不出来，请大家指教～～

我是用Roche的DIG Gel Shift试剂盒做的，用体外翻译的蛋白质时没有这种情况（核蛋白是用pierce公司的NE-PER试剂盒抽提的），但是换成核抽提物时大量的蛋白与探针的复合物都留在加样孔里跑不出来，不知怎么回事？

开始时以为是加样量的问题，可是我用了0.5ug/ul～2ug/ul的梯度，仍然没有什么变化。不知道是不是我的条件有问题。

配胶：10ml
H2O: 5.5ml
20%甘油：0.5ml
30%gel： 2ml
5*TBE： 2ml
10％AP： 75ul
TEMED: 7.5ul

体系：20ul
标记探针： 2ul
核抽提物： 3ul
5*Binding： 4ul
多聚Lysine：1ul
ddH2O： 10ul

我用的是Bio-rad的小电泳槽，80V,1Hr。

请高手指教一下，谢谢～～