【求助】关于PCR-RFLP中遇到的异常问题
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大家好,我目前在做PCR-RFLP的实验,但是实验过程当中出现了一个解答不了的问题.我所要酶切的片段总长是201bp,切开后是182和19bp,而19bp在琼脂糖凝胶上是不能显影的,所以只有182bp显影,201bp和182bp两个长度的片段在琼脂糖凝胶上是可以分辨出距离的微小差异的.我用已经测序过的分别带有纯合型和杂和型SNP位点的片段进行酶切来验证我的内切酶,试验了好几次,发现了一个不正常的现象,纯合型的应该是201bp长度的片段在凝胶上跑的距离反而比带有杂和型(即酶切位点)的经过酶切后长度应该是182bp的片段跑的距离还要远,两者应该跑的距离正好互反,试验了好几次,都是这个现象,有哪位知道其中可能的错误出在了哪里啊,万分感激,谢谢大家.
