划痕实验

近期本人在做划痕实验，实验步骤发出来，想和站友们讨论一下。请大家看看步骤有没有问题。

培养板划线：六孔板板底背面提前用黑色笔上下画两条通过孔中心的平行线，或每孔三条现，线距0.5-1.0cm 若干交叉点 多个固定监测点3 划痕：用200uL枪头，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)，每孔划三道；

细胞铺板：贴壁细胞0.25% 胰蛋白酶2-3min消化成单细胞悬液，1000r/min 5min，重悬，继而血球计数板计数，将细胞密度调整为2.5*105/mL，接种于六孔板；细胞铺板5*105个/孔，确保第二天细胞能够长满，每孔最终的培养基总量2mL；

细胞培养：37℃、5％CO2培养箱中培养24h；观察细胞铺满，铺满实验效果较好

配置培养基并分组 加药组与无血清组

细胞划痕：用200uL枪头，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)，每孔划三道；

清洗：PBS洗细胞2-3次，去除划下的细胞，加入培养基；

拍照：4倍镜下进行拍照，保证划痕居中且垂直，注意背景一致，可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定）；ImaJ分析图像