【求助】贴壁细胞收集方法?(准备提蛋白做WesternBlot)
我养的新生大鼠原代海马神经元,需要做WesternBlot(我提供标本请公司做的)。第一次我是直接在培养瓶里加入细胞蛋白抽提试剂和蛋白酶抑制剂(50ml培养瓶500ul:5ul),-20度保存一段时间后转移至-80度,干冰运输,公司那边说蛋白浓度太低,让我重新提供细胞标本给他们提蛋白。他们的冻存细胞方案是:“贴壁细胞,胰酶消化后加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体,加入1 ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中,低速离心沉淀细胞,弃去PBS,放入- 70°C冰箱保存。干冰运输。”
请教各位大虾:可以这样冻存细胞吗?有没有更详细更好的方法阿?因为海马神经元很难养,我很珍惜我的细胞,而且我马上要上临床了,也没有时间养细胞了!还有作WesternBlot提蛋白需要的细胞数量是多少阿?非常感谢各位大虾们帮忙!