【求助】微卫星种间扩增的疑问

各位大侠：
小弟一直在做微卫星，大致步骤：从NCBI上下载了EST序列设计引物，设计好的引物先在本物种上做PCR，然后挑取有扩增条带的引物在相近物种上再扩增。
今天用三条已经证明有产物的引物在另外一物种上做了下预试验，结果和预期的不太一样，图我附在后面。
对图的简单说明：1道是50bp的marker，2－4道分别是三条引物在相近物种上的扩增结果，5－8道是我先前的PCR结果又重新跑了下电泳（其中5－7为同一条引物，8和4是同一条引物），9道是100bp的marker。
疑问：1. 2－4道的点样孔较亮，是不是提取DNA时杂蛋白未去除干净？对实验结果的影响有多大？
2. 第4道出现了三条带，但是其位置与在本物种上的扩增结果相差较大（第8道为在本物种上的扩增结果），请问微卫星在种间扩增是不是位置相差很小？也就是说第4道出现的根本不是预期的结果？
3. 电泳图每条带后几乎都有拖尾，请问如何避免这种现象?
4. 如何使图看起来更清晰，我应该加多少EB和上样量？
5 我刚做了两个月的PCR，经验太少，希望高手能对这张电泳图作一个整体评价，小弟感激不尽！