【求助】表达载体中的目的基因需要自己的起始密码子和终止密码子吗？

我的目的基因约有500bp ,设计引物时将酶切位点分别加在起始密码子之前和终止密码子之后。我将目的片断插入pET32后，尽管酶切、测序都正确（只有一个碱基在第三位发生突变，为无义突变），可不管怎样优化条件，就是看不到目的蛋白的表达。
我想请问，我在设计引物时，是不是应该只选择目的基因的ATG和TAA之间的序列？
多谢指导！