菜鸟的一点蛋白sds-page经验，不对之处，请高手指点

在这里得到不少高手指点，使偶这个以前从来没摸过电泳的菜鸟，到现在终于跑出了自认为比较不错的page，想到当初偶是跌跌撞撞作过来的，因此，把偶跑电泳的一点的经验和教训总结一下，让和我一样基础的人少走弯路，不对之处请高手多多指点：

1、安装、密封
这是偶遇到的第一个困难，偶用的是北京六一的DYYII，开始用琼脂糖封两次都不行，灌分离胶时都漏，后来欧发现关键是琼脂糖要沸腾，趁热顺缝隙下流，而且不能留有气泡，否则容易漏。

2、灌胶
灌胶也很关键，偶怀疑很多胶跑完形成曲线而不是直线，可能与胶未混匀有关，因此，配完胶应该迅速搅匀，否则也容易形成局部凝胶。灌注胶的体积因板子而宜，浓缩胶不宜太短，否则浓缩效果不好，可能形成拖尾。

3、上样
开始，偶很不喜欢先加电极液再上样，我以为这样容易造成样品污染，后来欧发现，loading buffer 中的甘油实际上较重较粘，目的就是防止样品漂到别的上样孔里。偶现在上样已经很熟练，也很喜欢一股蓝线网下沉得感觉。操作时加样*垂直向下，样品垂直落入孔中，感觉真的很爽。上样时注意每个孔都填满，不上样品就上等量的loading buffer，这样跑出来的带比较直。

4 跑胶
关键是等样品在浓缩胶完全脱离进入分离胶后才加大电压，否则，可能造成拖尾或其它的不好现象。一般跑到离分离较下部1cm处停止，偶这个过程比较长，至少5-6hr，不明白为何？
跑完取胶，偶现在很熟练，而且不会碎胶，第一次时欧们曾经把玻璃板给弄碎才把胶弄出来，胶还给弄碎了
5 染色

染色也很关键，染色的效果主要取决于一是胶中蛋白的浓度， 二是染色的操作。胶中蛋白浓度，样品和marker都可以通过实践调整。染色的操作应该按照比较权威的protocol来进行，尤其关键前几步，固定、染色等，有时marker然不出来，有可能是这两步时间太短。不过，偶得银染效果还是不太好，偶估计也是时间太短的问题，那天解决了再给大家汇报。另外，说一点，虽然很多书上说对水要求很高，但欧感觉蒸馏水应该满足一般试验要求了

基本就先这么多，抛砖引玉，希望高手不要嗤笑，多多指点。下一步偶可能做蛋白的分离纯化，也请高手写点个人经验，也好少让偶走弯路!