L6肌肉细胞提出的蛋白浓度很低

用的10CM皿，但是测完浓度居然才有2.5-3左右，之前做的另一种细胞MH7A能有6左右。用的碧云天的裂解液强（自己加了2种抑制剂）还有配套的BCA试剂盒，但是感觉测出来的浓度会虚高一点。跑胶之后内参有，但是目标蛋白没有，我加了阳性药组，条带也很浅。换过CST的RIPA裂解液浓度也不高。想问问蛋白浓度低是什么原因？我加入裂解液后，冰箱放置20分钟然后用刮刀刮下来，超声大概30S吧（中间有间断），之后离心取上清。 因为之前也是这么做的，感觉手法上没有问题。