用于原代人类 T 细胞中多重转录组调控和代谢工程的多功能 CRISPR-Cas13d 平台

2024年2月14日《Cell》发表一项研究：CRISPR技术已开始彻底改变T细胞疗法；然而，传统的CRISPR-Cas9基因组编辑工具在安全性、有效性和范围上都受到了限制。为了应对这些挑战，我们开发了多重效应引导阵列（MEGA），这是一个利用 CRISPR-Cas13d 的 RNA 引导、RNA 靶向活性的T 细胞转录组进行可编程、可扩展调控的平台。MEGA 能在原代人类 T 细胞中实现定量、可逆和大规模多重基因敲除，而无需靶向或切割基因组 DNA。我们将 MEGA 应用于 CAR T 细胞衰竭模型，通过组合式 CRISPR 筛选，有力地抑制了阻断性受体上调，并发现了 T 细胞功能的配对调节因子。此外，我们还对MEGA进行了药物调控，以不依赖受体的方式控制CAR的激活。最后，MEGA 还能多重破坏免疫调节代谢通路，从而提高 CAR T 细胞的体外和体内适应性和抗肿瘤活性。MEGA 为癌症免疫疗法及其他领域的应用提供了一个多功能合成工具包。