【求助】T/A克隆转化
我要连接的PCR片段长度约为1.8kb,所使用的是TAKARA的PMD18-T载体,用于转化的菌株为JM109,可是进行蓝白筛选的时候,大多数都为蓝色菌落,鉴定白色菌落时也是假阳性。我的PCR产物是切胶回收的,连接体系是10ul,所加的PCR产物浓度也是严格按照公式计算所得,可是就是连不上,我已经做了三次了,请哪位高手指点一下,十分感谢。另外我还想请教一下,再做大片段PCR产物连接时,都应该注意哪些,在这里先谢了。
我要连接的PCR片段长度约为1.8kb,所使用的是TAKARA的PMD18-T载体,用于转化的菌株为JM109,可是进行蓝白筛选的时候,大多数都为蓝色菌落,鉴定白色菌落时也是假阳性。我的PCR产物是切胶回收的,连接体系是10ul,所加的PCR产物浓度也是严格按照公式计算所得,可是就是连不上,我已经做了三次了,请哪位高手指点一下,十分感谢。另外我还想请教一下,再做大片段PCR产物连接时,都应该注意哪些,在这里先谢了。