[求助]SOS急求助:我的NDV在RT-PCR时为什么总是不出目的片段
这个帖子发布于 19 年零 217 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位：
我的NDV在RT-PCR时为什么总是不出目的片段：
我的引物：
N1：5’ ATC GGC TCC AGA CCT TCT AC 3’
N2：5’ GAG TTG AGT CTG TGA GTC G 3’
ＲＮＡ提取方法： ３００ＵＬ尿囊液＋ ７５０ＵＬ ＴＲＩＺＯＬ
摇匀后室温５分钟， 再加 ２５０ＵＬ氯仿振摇后， 室温５分钟，１２０００rpm 离心１０分钟，水相加等体积异丙醇过夜沉淀，
13000rpm，离心１０分钟，１毫升 ７０％乙醇洗涤１２０００rpm 离心１０分钟．
ＲＴ－ＰＣＲ条件： ４２℃ ４５min
94℃ 5min
94℃ 50s
55℃ 40s
72℃ 60s
35cycles
72℃ 10min
退火温度我４６℃ ５０℃ ５５℃ 都试过了
下面是电泳图
５５各位：
我的NDV在RT-PCR时为什么总是不出目的片段：
我的引物：
N1：5’ ATC GGC TCC AGA CCT TCT AC 3’
N2：5’ GAG TTG AGT CTG TGA GTC G 3’
ＲＮＡ提取方法： ３００ＵＬ尿囊液＋ ７５０ＵＬ ＴＲＩＺＯＬ
摇匀后室温５分钟， 再加 ２５０ＵＬ氯仿振摇后， 室温５分钟，１２０００rpm 离心１０分钟，水相加等体积异丙醇过夜沉淀，
13000rpm，离心１０分钟，１毫升 ７０％乙醇洗涤１２０００rpm 离心１０分钟．
ＲＴ－ＰＣＲ条件： ４２℃ ４５min
94℃ 5min
94℃ 50s
55℃ 40s
72℃ 60s
35cycles
72℃ 10min
退火温度我４６℃ ５０℃ ５５℃ 都试过了
下面是电泳图
５５℃
我的NDV在RT-PCR时为什么总是不出目的片段：
我的引物：
N1：5’ ATC GGC TCC AGA CCT TCT AC 3’
N2：5’ GAG TTG AGT CTG TGA GTC G 3’
ＲＮＡ提取方法： ３００ＵＬ尿囊液＋ ７５０ＵＬ ＴＲＩＺＯＬ
摇匀后室温５分钟， 再加 ２５０ＵＬ氯仿振摇后， 室温５分钟，１２０００rpm 离心１０分钟，水相加等体积异丙醇过夜沉淀，
13000rpm，离心１０分钟，１毫升 ７０％乙醇洗涤１２０００rpm 离心１０分钟．
ＲＴ－ＰＣＲ条件： ４２℃ ４５min
94℃ 5min
94℃ 50s
55℃ 40s
72℃ 60s
35cycles
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退火温度我４６℃ ５０℃ ５５℃ 都试过了
下面是电泳图
５５各位：
我的NDV在RT-PCR时为什么总是不出目的片段：
我的引物：
N1：5’ ATC GGC TCC AGA CCT TCT AC 3’
N2：5’ GAG TTG AGT CTG TGA GTC G 3’
ＲＮＡ提取方法： ３００ＵＬ尿囊液＋ ７５０ＵＬ ＴＲＩＺＯＬ
摇匀后室温５分钟， 再加 ２５０ＵＬ氯仿振摇后， 室温５分钟，１２０００rpm 离心１０分钟，水相加等体积异丙醇过夜沉淀，
13000rpm，离心１０分钟，１毫升 ７０％乙醇洗涤１２０００rpm 离心１０分钟．
ＲＴ－ＰＣＲ条件： ４２℃ ４５min
94℃ 5min
94℃ 50s
55℃ 40s
72℃ 60s
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下面是电泳图
５５℃
