【已解决，是sds的锅】Chip不超声也是300bp小片段

各位战友，最近做Chip摸索超声条件，用的新芝细胞超声破碎仪，650w总功率*7%，实际功率约45W，4s on，8s off，超声梯度为15、30、60个循环，但结果是：

1.条带不弥散

2.对照组没有超声，直接PK消化65℃，4h的，（第二泳道）也是小片段

实验步骤：

1. 每组4*10^6个细胞，2000rpm，4min，离心收集

2.PBS 1ml重悬，加入甲醛交联（终浓度1%），室温下10min

3.125mM终浓度甘氨酸，终止交联，室温下5min

4.3000rpm，5min离心弃上清，PBS洗两次

5.500ul裂解体系：lysis buffer+蛋白酶抑制剂，冰上裂解30min，期间涡旋两次（难道是这两次涡旋导致的DNA片段化？）

6.每管取50ul出来留作对照组，余下450ul体系，每组进行相应的超声(45W，4s on，8s off，超声梯度为15、30、60个循环)，冰上进行

7.超声结束后，12000rpm，10min离心，取上清

8.对照组及实验组，每组取50ul+蛋白酶K，65℃（烘箱），5h后跑胶（2%，130V，20min），每孔上样10ul。

求各位大佬救救孩子，卡了一个多月了/(ㄒoㄒ)/~~