冈田酸如何溶解能让 DMSO<0.1% 并且不析出？

丁香实验

发布于 2023-05-19 · 浏览 1280 · IP 浙江浙江

这个帖子发布于 1 年零 356 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

👉前往【问答广场】

浏览更多实验问答

48 小时内有问必答~

Q：冈田酸的瓶子太大了，但里面只有25ug，加几微升DMSO无法润湿整个瓶壁，但是加多了的话就难以控制DMSO在0.1%以下了，怎么办呀？

A1：我一般都把dmso稀释19-29倍之后再做，效果会好一些

A2：可以尝试以下方法：

1. 尽量均匀涂抹：使用一个无菌的精细棉签或滴管，将DMSO沿着瓶壁均匀涂抹。确保尽量润湿整个瓶壁表面。这样可以增加DMSO和冈田酸的接触面积，帮助溶解。

2. 适当稀释：如果您加入的DMSO量不足以润湿整个瓶壁，您可以尝试适当稀释冈田酸。将冈田酸与较小体积的DMSO混合，然后将稀释后的溶液加入瓶中，以达到所需的最终浓度。确保您计算好稀释比例以保持冈田酸的浓度在所需范围内。

3. 制备工作储存液：如果您需要频繁使用冈田酸，您可以考虑制备一个工作储存液。首先将25μg的冈田酸溶解在较小体积的DMSO中，以制备一个高浓度的储存液。然后，根据您每次实验所需的量，从储存液中取出适量的冈田酸，再稀释到所需的最终浓度。

无论使用哪种方法，都要确保实验中的DMSO浓度在对样品或实验结果不会产生不良影响的范围内。如果您的实验需要非常精确的DMSO浓度控制，可以考虑使用称量法来准确控制DMSO的添加量。此外，根据您的实验目的，可能需要进行一些对照实验来评估DMSO对实验结果的潜在影响。

Q：如果用流感病毒假病毒感染巨噬细胞，能引起细胞因子的分泌吗？

A1：可以的，假病毒也是可以引起细胞因子分泌的

A2：是的，流感病毒假病毒感染巨噬细胞可能引起细胞因子的分泌。虽然假病毒本身不具备复制能力，但它们可以携带特定的基因表达载体，将目标基因导入宿主细胞中，从而引发细胞对病毒感染的反应。

流感病毒假病毒在巨噬细胞中感染后，会激活宿主细胞的免疫反应。这可能包括诱导细胞因子的分泌，如干扰素（Interferon）和促炎细胞因子（例如肿瘤坏死因子-α，白细胞介素-1等），以及其他与免疫应答相关的细胞信号通路。

因此，流感病毒假病毒感染巨噬细胞可以模拟真实病毒感染的免疫反应，并诱导细胞因子的分泌。这使得它成为研究巨噬细胞免疫应答和炎症模型的有用工具。

需要注意的是，病毒感染的具体效果和所诱导的细胞因子分泌可能取决于所使用的假病毒的设计、浓度和感染时间等实验条件。因此，在进行实验时，最好设计适当的对照组，并与其他研究结果进行比较，以更好地解释观察到的细胞因子分泌。

Q：我用CTAB法提取DNA的时候DNA浓度很低，而且掺杂了RNA，RNA的质量还很好，所以，如果用CTAB法提取RNA的话是怎样的步骤呢，求解答

A1：CTAB提RNA步骤：

1.取1.5ml的离心管加入1ml预热的CTAB缓冲液(亚精胺)(65度),加20ul(β-巯基乙醇)。

2.取材料研磨加入1.5ml的离心管中65度,10min(15min)加热,期间多次震动,摇匀。

3.取上清至另一1.5ml加入等体积氯仿异戊醇(24:1)振荡摇匀,4度,12000rpm,10min离心,取上清至另一1.5ml的离心管中。

4.重复一次。取上清至1.5ml的离心管中加1/4体积10mol/LLiCl,下20度沉淀6h度,12000rpm,20min或30min弃上清。

CTAB法提取RNA的步骤如下：

样品的制备：将待提取RNA的样品加入离心管中，加入RNase-free PBS洗涤1-2次，去除表面的细胞碎片和其他污染物，离心收集样品。

细胞破裂：加入细胞裂解液(Tris-HCl pH 7.5, 100 mM; EDTA pH 8.0, 10 mM; NaCl, 1 M; SDS, 1%)，混匀后孵育于65℃水浴中10-15分钟，直到细胞彻底裂解。

酚/氯仿抽提：加入等体积的酚/氯仿(25:24)混合液，混匀后离心，将上清液转移到新离心管中。

RNA沉淀：加入等体积的异丙醇，轻轻摇晃管子使其混合，离心收集RNA沉淀物，将异丙醇去除。

RNA清洗：加入75%的乙醇，离心去除，去除乙醇后将RNA干燥，再溶解于DEPC水中即可。

需要注意的是，RNA的提取需要采取一系列严格的操作措施，如穿戴手套、使用RNAase-free试剂、操作时不要出现摇晃等操作，以避免RNA的降解和污染，从而保证提取到高质量的RNA。

Q：请问下，在高效液相检测维生素C，总是出现平行进样两针峰面积差异大？

A1：可能是基线不一致的原因，建议把基线调平后再平行进样。

A2：在高效液相检测中，平行进样两针峰面积差异大可能是由以下因素引起的：

1. 注射技术：注射技术对于平行进样的结果非常关键。确保使用准确的进样量和相同的注射速度，并且注射针头的深度和位置保持一致。任何不一致或不准确的注射技术都可能导致峰面积差异。

2. 样品制备：样品制备过程中的不一致性可能导致平行进样两针的峰面积差异。确保在制备样品的过程中使用相同的方法、试剂和条件，以减少变异性。

3. 色谱柱状态：色谱柱的老化或污染可能导致峰面积差异。确保使用新鲜的、适合分析的色谱柱，并定期进行柱的维护和更换，以确保其性能稳定。

4. 流动相：流动相的配制和质量对于分析结果至关重要。确保流动相的配制准确，如pH值、盐浓度和有机溶剂的组成，并检查流动相的纯度和气泡情况。

5. 仪器条件：检查液相色谱仪的工作条件是否一致。确保在分析过程中使用相同的仪器条件，包括流速、温度、检测器设置等。

6. 校准曲线：检查校准曲线的准确性和线性范围，以确保在分析过程中可以正确定量目标物质。如果校准曲线不准确，可能会导致峰面积差异。

7. 样品稳定性：某些分析物在样品中可能不稳定，可能会导致进样针对不同样品的不同峰面积。确保样品在进样前的储存和处理条件相同，并尽量在分析前尽快进行。

Q：我是准备做水生动物病原检测，意思是可以同一个样本同时检出多个病毒病原还是提高单个病原的准确度？

例如大口黑鲈常见的LMBV和RSIV是不是可以同一个样品同时检出？有没有必要配备四通道的PCR仪？

A1：对于水生动物病原检测，可以选择同时检测多个病原或提高单个病原的准确度，具体取决于你的研究目的和实验需求。

1. 同时检测多个病原：如果你关注多个病原的存在与传播情况，同时检测多个病原可以提供更全面的信息。这可以通过使用多重PCR或基于核酸测序的方法来实现，其中使用多个引物或多个探针，分别特异性地检测不同的病原。这样可以在单个样品中同时检测多个病原，提高检测效率和节省时间。

2. 提高单个病原的准确度：如果你主要关注某个特定病原的检测准确度和灵敏度，可以将重点放在该病原的单个检测上。这样可以优化特定病原的检测方法，增加其灵敏度和特异性，确保准确地检测出目标病原。在这种情况下，单个通道的PCR仪可能就足够使用了。

关于大口黑鲈常见的LMBV和RSIV的检测，如果你希望同时检测这两个病原，可以考虑使用多重PCR方法，在同一个样品中检测它们的存在。这样可以提高效率并节省样品和试剂的使用量。至于是否需要配备四通道的PCR仪，这取决于你同时检测的病原数量以及你的实验规模。如果你只需要同时检测少量病原，例如LMBV和RSIV，那么具备两个通道的PCR仪就足够使用了。但如果你计划同时检测更多病原，四通道的PCR仪可能更适合，因为它可以提供更大的样品处理能力。

A2：大口黑鲈常见的LMBV和RSIV是可以同一个样品同时检出的，不需要四通道