大肠杆菌同源重组基因敲除筛选失败

目前做到了双抗（kan+Gm）平板筛选阳性菌株这一步，但是最后发现原本的菌株（已知的是有氨苄和卡那抗性）在这个双抗平板上也可以长得很好，所以目前筛选这一步的就陷入了僵境，所以我现在是不是只有换个抗性或者换其他的敲除方法才行了，不知道有没有同行做大肠杆菌基因敲除可以分享一下经验。谢谢！