求助| PCR扩增产物跑胶只有杂带没有我需要的目的基因带是怎么回事？？
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是这样的，我有的是目的基因的CDS序列，我利用这段CDS序列在NCBI上查询了核苷酸同源性分析，得到了相似性99.58%的所用相同材料的相同基因的转录本mrna homelog，导出这段序列在snapgene上查看，并利用这段序列的CDS区的上游和下游部分（非CDS区）合并在primer6中设计引物，因为我是问的学长，设计的巢式引物，也就是这对设计的引物是第一对引物即特异性引物，因为直接用CDS头和尾设计引物在ncbi上引物特异性不好，设计出来的引物特异性也在ncbi上检查了特异性，结果显示也只有我所设计这对特异性引物的那个转录本的结果，然后利用这对特异性引物扩增我所用的植物的总RnA逆转录出来的cdna，进行跑胶看能不能先P出来这段包含目的CDS区的较长的片段，然后并没有跑出来，温度梯度、模板添加量、我都进行了不同的设置，跑了两次都没跑出来，按照设计的这对特异性引物跑出来的条带应该在2585bp，但是如图，只有低于目的条带的位置的条带，也就是杂带吧，用的maker是15000的，我真的不知道是哪儿出问题了，求解，大佬们
最后编辑于 2023-04-15 · 浏览 680
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