快报 | 结核分枝杆菌RNA在不同标本中快速诊断淋巴结结核中的应用

作者：喻国灿，林婷，俞跃辉，陈佩君，陈萌晗，张莹，杨高怡

第一作者及单位：喻国灿，浙江大学医学院附属杭州市胸科医院，浙江省结核病诊疗中心

通信作者及单位：张莹，杨高怡，浙江大学医学院附属杭州市胸科医院

Application of Mycobacterium tuberculosis RNA for the Rapid Diagnosis of Lymph Node Tuberculosis Using Different Specimens

Yu G, Lin T, Yu Y, Chen P, Chen M, Zhang Y, Yang G.

Infect Drug Resist. 2023，16:179-187.

doi: 10.2147/IDR.S392045.

研究背景

     结核分枝杆菌（MTB）感染导致人类的结核病（TB）。根据MTB感染的部位，结核病可大致分为肺结核（PTB）和肺外结核（EPTB）。在所有EPTB中，淋巴结结核（LNTB）的发病率最高，而颈部LNTB是最常见的LNTB类型。早期快速诊断LNTB是治疗该疾病的关键。诊断延误会延误治疗，导致局部压迫、脓肿形成和窦道形成，影响患者的社交能力和生活质量。LNTB涉及不同的病理阶段，允许临床医生获取各种标本，如穿刺、脓液和组织活检标本。传统的经典MTB检测方法[抗酸杆菌（AFB）涂片和培养]因其相应的缺陷而不能用于快速诊断。

    目前，分子检测试验主要用于结核病的早期和快速诊断。 目前大多数分子检测的目标是针对MTB-DNA的；对MTB-RNA的分子检测研究有限。MTB-RNA可以通过同步扩增和检测技术进行检测，该技术由上海仁度生物科技股份有限公司发明，在中国的结核病实验室广泛开展。MTB-RNA检测结核病的应用主要集中在PTB的辅助诊断上，仅限于EPTB的应用。但是，MTB-RNA应用于LNTB的快速诊断还有待建立；此外，该方法对LNTB的诊断准确性还不清楚。此外，由于LNTB可获得多种标本，使用不同标本的MTB-RNA的诊断效果差异尚不清楚。因此，本研究旨在使用MTB-RNA诊断LNTB，评估其在LNTB快速诊断中的准确性，并比较使用不同标本的MTB-RNA的诊断准确性差异，为临床医生提供更多关于该检测方法诊断LNTB的信息。

研究方法

    笔者回顾性分析了2018年3月至2021年1月在浙江省结核病诊治中心住院的疑似外周LNTB患者的临床资料。外周肿大的淋巴结（LN）和发热、盗汗等结核病症状的患者，或其他部位有结核病的患者被怀疑患有LNTB。具有用于LNTB诊断的相关LN标本（如穿刺、脓液和组织标本）以及同时具有MTB培养和MTB-RNA检测结果的相关标本的患者被纳入研究。未获得相关检测的LN标本的患者、被诊断为其他LN疾病的患者、未接受抗结核治疗的患者以及失去随访的患者被排除在外。所有患者或其监护人签署知情同意书，分别进行LN穿刺、活检或脓肿切开以获得LN穿刺、组织或脓液标本。

    本研究以最终的临床诊断为参考标准。最终的临床诊断是根据临床症状、结核病免疫测定结果、LN标本的其他分子检测结果（如Xpert MTB/RIF）、影像学或超声检查结果、病理学检查结果和随访结果做出的。根据最终的临床诊断标准，患者被分为LNTB组和非LNTB组。在LNTB组中，通过培养在LN标本中检测出MTB，其依据是与结核病有关的临床症状、影像学或超声检查结果为阳性、病理学结果为阳性、免疫学检查为阳性、其他分子检查结果为阳性，以及有效的抗结核治疗。在非LNTB组，MTB阴性的证据包括无效的抗结核治疗和其他病原体感染的有效的相应治疗。

研究结果

    285例患者被纳入研究，包括103份组织、96份穿刺和86份脓液标本。患者的平均年龄为36.1±16.0岁，其中157人（55.1%）为女性。两名患者的HIV检测结果呈阳性。只有36份LN标本进行了AFB涂片检测，其中3份（8.3%）为阳性，其余33份（91.7%）为阴性。

    在所有患者中，参照最终的临床诊断标准，254例被诊断为LNTB，包括91份组织、79份穿刺和84份脓液标本；31例被诊断为非LNTB，包括12份组织、17份穿刺和2份脓液标本。在LNTB组的所有标本中，62份MTB培养呈阳性，包括16份组织、20份穿刺和26份脓液标本，103份MTB-RNA阳性，包括28份组织、27份穿刺和48份脓液标本。在非LNTB组，没有发现MTB培养和MTB-RNA阳性的标本。  

    一、MTB培养和MTB-RNA的诊断准确性

   MTB培养诊断LNTB的总体敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为24.4%（95%CI:19.3%～30.2%）、100.0%（88.8%～100.0%）、100.0%（94.2%～100.0%）、13.9%（9.6%～19.2%），以及0.62（0.56～0.68）。MTB-RNA的总体敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为40.6%（34.5%～46.9%）、100.0%（88.8%～100.0%）、100.0%（96.5%～100.0%）、17.0%（11.9%～23.3%）和0.70（0.65～0.76）。

   对于组织标本，MTB培养的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为17.6%（10.4%～27.0%）、100.0%（73.5%～100.0%）、100.0%（79.4%～100.0%）、13.8%（7.3%～22。9%）和0.59（0.49%～0.68），MTB-RNA的含量分别为30.8%（21.5%～41.3%）、100.0%（73.5%～100.0%）、100.0%（87.7%～100.0%）、16.0%（8.6%～26.3%）和 0.65（0.55～0.74）。

   对于LN穿刺标本，MTB培养的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为25.3% （16.2%～36.4%）、100.0%（80.5%～100.0%）、100.0%（83.2%～100.0%）、22.4%（13.6%～33.4%）和0. 63（0.52～0.72），MTB-RNA的值分别为34.2%（23.9%～45.7%）、100.0%（80.5%～100.0%）、100.0%（87.2%～100.0%）、24.6%（15.1%～36.5%）和0.67（0.57～0.76）。

   对于脓液标本，MTB培养的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为31.0%（21.3%～42.0%）、100.0%（15.8%～100.0%）、100.0%（86.8%～100.0%）、3.3%（0.4%～11.5%）和0.65（0.54～0.75）。MTB-RNA的值分别为57.14%（45.9%～67.9%）、100.0%（15.8%～100.0%）、100.0%（92.6%～100.0%）、5.3%（0.6%～17.8%）和0.79（0.68～0.87）。

    二、使用不同标本的MTB-RNA的诊断准确性比较

    笔者比较了使用不同标本的MTB-RNA的诊断准确性的差异。与LN穿刺和组织标本相比，脓液中MTB-RNA的敏感度最高（P＜0.05）。MTB-RNA的敏感度与LN穿刺和组织标本的敏感度相当，且差异不大（P＞0.05）。使用不同标本的MTB-RNA检测的特异度是一致的（100%）。脓液标本中MTB- RNA的诊断准确性最好，但与其他两种标本相比，差异未达到显著性（P＞0.05）。

研究结论

    MTB-RNA对LNTB的快速诊断效能中等，但敏感度较低。淋巴结脓液标本对 MTB-RNA 检测最敏感，其次是穿刺标本；组织是最不敏感的。如果仅使用此测试进行诊断，则最好获取脓液标本。

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