求教泛素化实验
预检测细胞中蛋白A的泛素化变化情况,有的文章将细胞中转染干预因素B+HA-Ub质粒(泛素过表达质粒),然后使用MG132处理各组细胞后提总蛋白,然后再向各组蛋白中加入HA-tag抗体做蛋白IP,然后WB检测蛋白A的泛素化情况。问题:
1.为什么要转染HA-Ub过表达质粒?泛素化实验都需要转染这个质粒吗?
2.为什么不用蛋白A抗体做IP,然后用泛素抗体做WB检测蛋白A的表达?
最后编辑于 2023-01-27 · 浏览 4318
预检测细胞中蛋白A的泛素化变化情况,有的文章将细胞中转染干预因素B+HA-Ub质粒(泛素过表达质粒),然后使用MG132处理各组细胞后提总蛋白,然后再向各组蛋白中加入HA-tag抗体做蛋白IP,然后WB检测蛋白A的泛素化情况。问题:
1.为什么要转染HA-Ub过表达质粒?泛素化实验都需要转染这个质粒吗?
2.为什么不用蛋白A抗体做IP,然后用泛素抗体做WB检测蛋白A的表达?
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