Trizol法提取RNA

1、不同类型样本的前处理

① 组织:取-80℃冰箱中保存的新鲜冰冻组织，重量约为100mg，加入1ml Trizol试剂，用匀浆器研磨成浆，移至无RNase的1.5ml EP管中，裂解10min。

② 细胞：加入1ml Trizol试剂，用枪吹打混匀，移至无RNase的1.5ml EP管中，裂解10min。

③ 血清（尿液）：按Trizol 1:3比例加入裂解液，用枪吹打混匀，裂解10min。

④ 血液：按 1:3加入1×红细胞裂解液，裂解10min，12000转3min离心，倒掉废液，加1ml Trizol，吹打混匀，裂解10min。

2、加入200μl氯仿，剧烈颠倒混匀数次，室温放置5分钟。

3、4℃，12000rpm，离心15min，可见分成上（RNA）中（蛋白）下（DNA）三相。

4、转移上层水相（约400μl）于另一新1.5ml EP管中，加入400μl异丙醇，混匀后室温静置10min。

5、4℃，12000rpm ，离心10min，管底可见白色的RNA沉淀。

6、弃上清，加入无RNase的75%乙醇1ml，涡旋混匀后，4℃，10000rpm，离心5min。

7、重复步骤6一次。

8、弃上清，空气中干燥RNA沉淀5-10min，将沉淀溶于20μlDEPC水中。

9、取溶解后的RNA2μl用微量分光光度计测定OD260、OD280以及OD260/OD280值，计算RNA的纯度和浓度。

根据OD260/OD280比值，估测RNA质量，比值在1.8-2.0之间满足实验要求。根据吸光光度值按下列公式计算样品RNA的浓度：总RNA浓度（μg/μl）=OD260×40×10^-3。

将总RNA放于-80℃冰箱内保存以备用。