转染Flag-目的基因质粒做不出WB
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在293T细胞中做了如下处理：CTL（无转染试剂），flag阳性质粒，flag-目的基因质粒（已测序）。6-well板，每孔转染2ug质粒，6ul PEI。转染48h后收细胞蛋白做WB。
WB结果：
anti-flag抗体（CST）：CTL（无条带），flag阳性对照（条带相当清楚且蛋白量大），flag-目的基因（条带很弱，很细一条带）
我本来是想用flag-目的基因转染之后过表达目的基因做Co-IP，但是看着WB的结果感觉过表达效果并不好。但是同样的转染条件，阳性对照的flag标签蛋白就特别明显，想知道这是为什么？希望各位大神帮帮忙，看看是哪儿出了问题
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