小鼠原代脑微血管内皮细胞分离培养

花费了大半年时间，参考了很多protocol，从培养基配制方案、胶原、酶等进行摸索，终于成功提取小鼠原代脑微血管内皮细胞。目前国内外提取小鼠原代脑微血管内皮细胞的方法有酶消化+密度梯度离心、机械分离+网筛法、酶消化+网筛法等。使用的培养基也各种配比，有80%DMEM+20%FBS+ECGS+肝素钠、80%DMEM+20%FBS+bFGF+肝素钠、80%DMEM+20%FBS+ECGS+bFGF+肝素钠、80%DMEM+20%FBS+EGF+肝素钠。也有用内皮细胞培养基代替DMEM的。其中，bFGF浓度差异大，肝素钠浓度也不一样。课题组对培养皿铺胶进行了摸索，比较明胶和Fibronectin对初次种植后脑微血管内皮细胞的粘附能力。成功分离和培养了小鼠原代脑微血管内皮细胞，发现在第9代的时候原代脑微血管内皮细胞成血管环分布。