细胞培养全过程|个人记录贴

0.配液

完全培养基40mL：DEME 35.6mL，血清4 mL，双抗0.4mL。

PBS 40ml   0.25%胰酶10ml

1.细胞复苏

试剂：血清培养基（完全培养基）

①液氮取出冻存管，快速转到37℃水浴1min（只有一小块冰）

②打开冻存管，迅速将细胞悬液吸到15ml离心管，混匀

③加10ml37℃预热培养液1000r离心5min，弃去上清

④细胞沉淀加10ml预热培养液，培养

2.细胞传代

试剂：PBS，胰酶，完全培养基（PBS和完全培养基37℃复温15min）

①观察：细胞生长在百分80以上。

②弃液：打掉细胞瓶的培养液（可直接倒）

③清洗：PBS洗2次/6ml，并打掉（可直接倒）

④消化：用胰酶1ml轻摇后（消化长短各有不同，可短不可长）消化3分钟后取出观察消化情况

⑤吹打离心：用2ml完全培养基混匀终止消化（多为胰酶两倍体积，有些细胞不需要胰酶。例如，巨噬细胞），转移到10ml离心管，800-1000r 5分钟离心后离心液打掉

⑥重悬计数：2ml完全培养基（不同细胞重悬体积不同）重悬细胞，显微镜计数细胞数目（根据根据铺板密度选择）

⑥传代培养：转到新的培养瓶（瓶内提前加3ml培养液，根据不同细胞选择体积）后，选择一定的细胞悬液（1：2），37℃培养。

3.细胞换液（细胞若长的快，则无需换液）

试剂：PBS，完全培养基

①弃液：

②清洗：PBS洗两次

③加液：加新培养基1-3ml

④培养：

4.细胞冻存

试剂：冻存液（DMSO：胎牛血清=1：9， 提前制备。可用不同冻存配方)，PBS，胰酶，完全培养基

①观察

②弃液

③清洗

④消化

⑤吹打

（与传代相似）

⑥离心：1000r5分，弃液

⑦冻存：加冻存液，吹打均匀，每管1ml入管，4℃冰箱20min，-20 30m，-80 过夜，液氮长存。