【实验经验】动物细胞培养中的问题与分析

动物细胞培养是生物学基础实验中的基础，养不好细胞，后续的实验都难以开展。而细胞培养中也时常会有各种状况发生，例如细胞生长缓慢、细胞不贴壁等，那么它们可能的原因都有什么呢？让我们一起了解下吧！

Q

细胞生长缓慢

可能原因：

1. 培养液及培养方法有误；更换不同培养液或血清也可能导致生长缓慢。
2. 培养液中一些细胞生长必须成分如生长因子耗尽或缺乏。
3. 培养物中有少量细菌或真菌污染；
4. 接种细胞起始浓度太低；
5. 细胞老化；
6. 支原体污染。

解决方法

1. 检查培养液和培养方法是否正确，比较新培养液与原培养液成分，让细胞逐渐适应新培养液；
2. 换入新鲜配置培养液，或补加生长因子；
3. 用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
4.  增加接种细胞起始浓度；
5. 换用新的保种细胞；
6. 分离培养物，检测支原体，如发现支原体污染，丢弃培养物。

Q

细胞不贴壁生长

可能原因：

1. 支原体污染。
2. 培养瓶瓶底不干bai净。
3. 培养液pH 值过碱（NaHCO3 分解）。
4. 消化du液或培养液配制错误、过期储存、储存不当。
5. 细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）。
6. 接种细胞起始浓度太低或太高。

解决方法：

1. 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.
2. 分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发现支原体污染,丢弃培养物.
3. 注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.
4. 使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）.
5. 重新配置消化液或培养液.
6. 启用新的保种细胞.
7. 调节最佳接种细胞浓度.

Q

培养细胞死亡

可能原因：

1. 培养箱内无CO2；
2. 培养箱内温度波动太大；
3. 细胞冻存或复苏过程中损伤；
4. 培养液渗透压不正确；
5. 培养液中有毒代谢产物堆积。

解决方法：

1. 检测培养箱内CO2；
2. 检查培养箱内温度；
3. 取新的保存细胞种；
4. 检测培养液渗透压；
5. 换入新鲜培养液。