TGF-β（转化生长因子β）干粉溶解及储存步骤

TGF-β（转化生长因子β）干粉溶解及储存步骤：

1. 开盖之前一定要离心

冻干粉在运输过程中，会因为外力的因素粘附于管壁或者管盖上面，在开盖之前，先通过离心操作，将冻干粉收集于管底，避免损失很浪费。快速离心10000-13000 rpm，20-30 s；若没有高速离心机，3000-3500 rpm，5 min。

处理：使用前请勿开盖，离心(约13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。

2. 离心之后，向冻干粉中加入相应复溶buffer，用枪头轻轻吹打混匀，重悬至浓度不低于100 μg/mL。

①溶解之前，一定要按照说明书上的提示，使用相应复溶buffer重悬冻干粉。

重悬溶液的PH值和离子强度对于重组蛋白的溶解性好坏有很重要的影响；如果使用的buffer不合适，很可能产生冻干粉不能完全溶解或者根本无法溶解的现象产生，最终导致溶解之后的细胞因子或者重组蛋白活性不够或者丧失。

②溶解之前，一定要按照说明书上的提示，溶解到指定的浓度。

按照说明书上的提示，将冻干粉稀释到指定的浓度范围，有利于维持细胞因子或者重组蛋白良好的稳定性。如果高于或者低于指定的浓度范围，一方面可能会造成细胞因子或重组蛋白的活性下降；另一方面，蛋白可能会出现聚集、导致部分蛋白未溶解，活性减弱；最后，高于指定的浓度范围，可能会超过蛋白的最大溶解度，导致蛋白无法完全溶解。

处理：在ddH2O或50 mM柠檬酸盐中复溶，浓度为100μg/ml。

3.用复溶buffer直接溶解的细胞因子或重组蛋白液体可在2-8℃最长保存1周。

对于周期较短的实验（不超过7天），可以直接取该条件下保存的细胞因子或者重组蛋白溶液加入到培养体系内即可，待一周之内用完；如果实验条件设置的使用浓度低于复溶之后的溶液浓度，请用含载体蛋白进行稀释，如果稀释液不含载体蛋白，容易导致细胞因子或者重组蛋白粘附在管壁或者瓶壁上，

使其在溶液中的浓度下降，进一步导致细胞因子或者重组蛋白的活性减弱。

处理：①若您实验周期≤7天，取复溶后的溶液加入培养体系内，待1周内用完；

        ②使用浓度＜复溶后溶液浓度（100μg/ml），用含载体蛋白的溶液进行稀释至使用浓度；

4.若要长期保存，则需用含载体蛋白（0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或 5% 海藻）的溶液进一步稀释，然后分装冻存与-20℃至-80℃。

用复溶buffer溶解的冻干粉，不可直接冻存于-20℃至-80℃。因为塑料管壁对蛋白有很好的吸附作用，会导致细胞因子或者重组蛋白粘附在管壁不易分离，进而导致溶液中细胞因子或者重组蛋白的实际浓度偏低，最终导致其活性下降。而载体蛋白可以预先封闭塑料管壁上蛋白结合位点，使细胞因子或者重组蛋白不会粘附于管壁。因此长期保存，在分装冻存前，一定要用含载体蛋白的溶液进一步稀释，稀释后的蛋白浓度不低于 100 ng/μL，因大量的载体蛋白可以保证低浓度的细胞因子或者重组蛋白仍然维持较高的稳定性。

注意：稀释用的含载体蛋白的溶液一般不可以用水，用的溶液指有一定缓冲能力、PH值为中性的溶液，如PBS，培养液DMEM或者RPMI1640等。

处理：第1步后直接进行第4步：直接用含载体蛋白（0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或 5% 海藻）的溶液（除水外）/培养基进行稀释，稀释后的蛋白浓度不低于100 ng/μL且分装体积不低于20uL