巨噬细胞培养

巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的 重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细 胞群，在条件适宜下可生活 2－3 周，多用做原代培养，难以长期生存。

巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难 以建株。

培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞， 以小鼠腹腔取材法最为实用， 其法如下：1、实验前三天，向小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 lml（勿注入肠内！，以 ） 刺流产生大量的巨噬细胞。

2、引颈处死小鼠。

3、手提鼠尾将其全浸入 70%乙醇中 3－5 秒。

4、置动物于解剖台，用针头固定四肢，持镊撕开腹部皮肤，但勿伤及腹膜壁， 把皮肤拉向上下两侧，暴露出腹膜壁。

5、用 70%酒精擦洗腹膜壁，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同时用手指从 两侧压揉腹膜壁，使液体在腹腔内流动。

6、 用针头轻挑起腹壁并微倾向一侧． 使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。

7、小心拔出针头，把液体注入离心管。

8、4℃下 250g 离心 10 分钟后，去上清，加 10ml Eagle 培养基。

9、计数细胞。每只鼠可产生 20 一 30×106 细胞，其中 90%为巨噬细胞。

10、以 3×105 个贴附细胞/平方厘米接种。

11、接种数小时后，除去培养液，可去除其它白细胞，纯化培养细胞，用 Eagle 液冲洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培养液置 CO2 温箱中。