BDA顺行示踪问题

各位师兄和师姐，我目前在研究脊髓损伤的大鼠的模型，需要用到BDA示踪技术，前期，我已经做了4批大鼠，但是一直做不出来，实验室从来没人做这个技术，目前，我碰到几个问题，希望有好心人能够指导下我，万分感谢！！！

（1）：定位问题，我试过按大鼠图谱定位，图谱的大鼠体重在290克左右，我是按照图谱左右各挑选3个点，共6个点，根据我的前后距离，参照图谱进行矫正，每个点500微升BDA，2周后，取T10染色，没有做出结果，第二次，我是按别人文献定位，定8个点，1000微升注射，还是没染出来，我想知道，各位师兄师姐的定位，能否给我下参考，谢谢！！

（2）染色问题：后期，我是在脊髓C7位置进行注射，共注射，1000微升的BDA，2周后取材，切片，具体步骤如下：

PBS清洗6次，每次10分钟，10%牛血清封闭1小时，链酶亲和素-555染色，之后清洗，DAPI封闭，拍片，结果不理想，

我现在一直做不出来，已经查阅了很多文献，没有理想办法，请教了很多人，都没有给我回复，希望能有做过这方面的老师能给我一些指导，万分感谢！！！