【求助】目的片段与载体连接不上
发布于 2019-07-10 · 浏览 1516 · IP 湖北湖北
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各位大神，老师们好~
希望大牛们帮帮忙分析一下原因在哪里
真菌的基因，目的片段大小为五百多和八百多bp，用的taq酶和高保真酶，做的胶回收，条带均为目的条带且亮，用T1载体连接是25℃，8min；用pEasy-Blunt载体连接也是25℃，8min，感受态细胞trans-T1
用100微升离心后的菌液涂板，长得不好，挑单克隆，加Amp用LB摇菌液，用自己的特异性引物验证，一直没有条带，不知道什么原因。菌液的浓度做过调整，感受态细胞是在全式金购买的，未过期，实在是不知道哪个环节出现了问题，求大神们帮帮忙指点一下
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1516
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