IP检测泛素化的上样量和蛋白浓度问题thermo26149
丁香园临床病例数据库
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苏虹
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收录时间 2025年5月18日
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请教各位，我用Thermo26149试剂盒做的IP，没有经验，有几个问题想看看有没有帮忙解答的。谢谢！
1、细胞裂解一步，我是根据说明书提供的细胞数配裂解液加进去的(说明书上裂解液的量比平时做普通WB时用Ripa的量多不少)，得到的裂解蛋白浓度都是1~2ug/ul，是不是太低了？没办法做WB啊，加少了又怕裂解不充分。不知大家都多少细胞加多少IP裂解液？能得到多少蛋白？我是6孔板。
2、IP前我把每组蛋白浓度都调成一致了，最终IP后的蛋白还用测浓度吗？还是直接上样？我测出来的浓度非常低。最终能得到50~60ul蛋白，大家都是直接做WB吗？
3、如果测泛素水平的话，最后WB条带位置是在诱饵蛋白附近还是泛素分子量附近？
4、这个试剂盒用的是树脂交联抗体，最后一步可以再生和存储树脂，意思是抗体还在树脂上下次可以继续用吗？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2.1 万
