E-cadherin在肿瘤细胞中的表达

最近一直在肿瘤细胞MDA-MB-231中，检测E-cadherin蛋白表达情况。使用碧云天强裂解液+PMSF提蛋白，用的是Abcam的抗体，按照抗体说明书采用最高浓度稀释和脱脂奶粉孵育一抗、封闭，上样量试过20ug,30ug,50ug,70ug。12%分离胶，5%浓缩胶，电泳：80V 200mA 0.5h+120V 200mA 1h；转膜：150V 216mA，2.5h。曝光1-10min都试过，但是都没有条带。有没有其他同学也遇到过同样的情况，可能是什么原因呢？怎么解决呢？同一批蛋白检测N-cadherin没有问题，就是灰度很弱，但还是能看见，内参也是整齐的。