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关于神经递质检测,多巴胺,GABA等

卫生检验学医学生 · 最后编辑于 2017-08-24 · IP 山东山东
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这个帖子发布于 7 年零 324 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

      

     本人是医科大学的神经递质检测课题研究者,看到递质测量版块大家有关于神经递质检测的种种疑问和误区,所以想在这里写一些关于神经递质检测方面的观点与看法,欢迎批评指正,如果有任何其问题我将尽能力一一解答。谢谢!

    首先关于神经递质的介绍:

    神经递质(neurotransmitter)是一类在神经元突触间起信息传递作用的特定化学物质,主要存在于神经系统中,在神经元内合成后,由突触前膜释放并立即与相应的突触后膜受体结合从而发挥调节机体生理功能的作用。神经递质及其代谢产物广泛分布于中枢和外周神经系统,在维持各项生命活动中起着非常重要的作用。已经证实神经递质的失调或紊乱和多种神经疾病密切相关,如帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)、焦虑、精神分裂、抑郁和阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)等。

     现代生物化学将神经递质按结构分为乙酰胆碱、单胺类、氨基酸类、神经肽类等,它们在生物体的神经系统中发挥着重要作用。相对于早期的观测,特定的单胺类神经递质(如多巴胺DA和色氨酸TRP)含量异常影响特定的精神状态,最近的研究表明,多种神经递质代谢途径参与调节人的精神状态,例如神经心理的微调取决于各种类型的神经递质和神经调质之间的整体平衡。神经递质通路中比较典型的通路有多巴胺代谢途径和色氨酸代谢途径,有证据显示多巴胺代谢途径和色氨酸代谢途径之间存在相互作用,这些发现进一步说明,为了准确破译帕金森以及其它神经系统疾病神经递质失衡机制,仅靠单独研究几种神经递质是不足的和不确切的。科研工作者正越来越关注它们整体的代谢通路来研究机体代谢网络的变化及相关的代谢酶活性的改变,其中包括多巴胺代谢通路、5-羟色胺(5-HT)代谢通路和犬尿氨酸(KYN)代谢通路。高通量分析特定通路中的完整代谢物,更加深入的对某些微量代谢小分子进行定量分析,提供更加准确的定量分析结果,从而揭示生物体代谢活动及疾病的发病机制和用于评价诊断治疗效果。

     神经递质的检测手段:

     神经递质可被多种方法检测,最常见的是高效液相色谱串联电化学检测器或荧光检测器(HPLC-ECD,FID)。但是,电化学检测器检测背景高,分离能力差;荧光检测器基质干扰严重。随着质谱技术的发展,液质联用即液相色谱串联质谱(LC-MS)主要应用于这些化合物的检测,其具有高灵敏度,特异性好和高通量的优点,适宜检测微量、痕量水平的神经递质。

      高效液相色谱是一种准确度高,分离范围广的快速分离方法,它对化合物的结构破坏性小,适合有机分子和生物分子的分离。质谱具有其他分析方法无可比拟的灵敏度,对于未知化合物的结构分析定性十分准确,对相应的标准样品要求也比较低。高效液相色谱联用如HPLC/MS,加上分离效果很好的色谱可以作为质谱的进样系统,质谱作为色谱的鉴定仪速度快,分离好,应用广。色谱-质谱联用成为最好的用于分析微量有机混合物的仪器。

     本人课题所研究测定的十几种神经递质:

     GABA, 多巴胺(Dopamine,DA),高香草酸(Homovanillic acid,HVA),犬尿氨酸(Kynurenine,KYN),5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT),3-甲氧酪氨(3-Methoxytyramine,3-MT),3,4-二羟基苯乙酸(3,4-Dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC),去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE),5-羟基吲哚乙酸(5-Hydroxyindole acetic acid,5-HIAA),色氨酸(Tryptophan,TRP),3-羟基犬尿氨酸(3-Hydroxykynurenine,3-HK), N-乙酰基-5-羟色胺(N-Acetyl-5-hydroxytryptamine,VMA),  褪黑素(Melatonin),酪胺酸(Tyrosine),4-羟基-3-甲氧基苦杏仁酸(DL-3-Hydroxy-4-methoxymandelic acid,4H3MP)和3-羟基-2-氨基苯甲酸(3-Hydroxyanthranilic acid,3-HAA),肾上腺素(Epinephrine,E)。液相色谱串联质谱方法。

    这十几种物质是同时测定,用的是ESI正离子模式,先衍生化后测定的方法,衍生化测定具有很大的优势,促进离子电离,改善物质峰形,大大提高了检测的灵敏度。在检测方法学上,检测方法分为外标法和内标法,内标法是通过加入和待测物质相近的内标从而抵消或扣除样本处理过程中的影响,因此更加准确,大多数分析方法用的也是内标法。最合适的内标是待测物质的同位素取代物,即同位素内标,但是价格比较昂贵,我们测定神经递质的时候买了全部的同位素内标,采用的内标法检测这些神经递质,力求结果精确。

    神经递质代谢通路图:

img

       本人课题做过血浆、尿液、小鼠分区脑组织如纹状体、视网膜等生物组织样本的神经递质测定。积累了一定的经验和技术。神经递质大多为极性物质,测定时一般先对其进行衍生化,然后用反相高效液相色谱串联质谱检测效果最佳,检测限低,灵敏度高。

      上述内容均为原创,转发引用请注明。

      欢迎各位战友同行交流,共同进步,我将尽能力一一解答!



     

神经递质.docx (78.9 KB)

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