RAW264.7培养总结

RAW264.7培养经验

1， 基本情况: 小鼠来源白血病毒诱导肿瘤细胞，属于巨噬细胞，贴壁生长。下图是ATCC来源。虽说ATCC权威，但是园子里面主流观点是以椭圆圆形细胞为主，激活分化后才有触角。

https://www.atcc.org/Products/All/TIB-71.aspx#generalinformation

形态以类圆形和不规则为主，一般1～2个核，极少数有3个核，胞浆伸展时胞体较大。镜下细胞为小珍珠似的圆形椭圆形。

2，培养情况

培养条件：10%FBS高糖DMEN，进口gibco血清更好

传代：细胞增殖较快，70%即可传代，细胞有触角也提示需要传代，1：3----1:6传代，推荐使用皿。传代时切记不要使用胰酶，正常情况下此细胞贴壁不牢，直接吹打即可，胰酶消化会使细胞伸出触角改变形态。我是直接用培养基吹打，也可以用PBS，感觉无差异。

冻存和复苏：和普通细胞无异。

RAW264.7作为巨噬细胞有很强的吞噬能力，吞噬抗原后伸出长角，就是大家常见的伪足。同时贴壁黏附能力增强，传代时难以消化下来。

   该细胞贴壁时间短，成片生长，似小菌落般小片生

长，最后连,成一片并会叠层。传代密度不易过高或者过低，过低会导致细胞生长缓慢甚至不生长，过高，细胞会长出伪足。

3， 关于RAW264.7分化，

正常细胞为贴壁不牢的圆形椭圆形细胞，分化后伸出伪足，贴壁能力增强。

避免方法，

1， 血清最好是进口的真血清

2， 密度不要太高或者太低，由其是需要传代时切不可拖延时间

3， 传代时切不可胰酶消化，直接吹打就能下来

4， 不要污染，包括其他细胞株的污染

5， 园子里有每天换液的说法，尚未尝试

以上有总结园子前辈的经验，也有个人经验总结。不足之处，还请各位战友多多指导交流。