同源重组法进行质粒载体构建？

1.我现在遇到的问题是目的基因和载体纯化之后就没有了？那么我可以不纯化直接连吗？用同源重组的方法？

2.连接的比例怎么安排比较好？

3.我的同源重组是你这样做的？目的基因PCR扩增，不进行酶切，先纯化。载体进行酶切，在纯化回收。我的纯化都是用琼脂糖纯化试剂盒做的。然后确定东西还在，在进行连接？我想有谁做过同源重组法进行质粒载体构建的，能一起交流一下，我大概做了2个多月，希望有一个好的办法将载体构建成功。