免疫荧光双标染色求助

各位大神，我做的是免疫荧光双标，由于共聚焦显微镜没有594的波长，所以只照了绿光，我标记的是四型胶原蛋白，抗体是abcam，有没有哪位老师知道这是怎么一会事儿呢，我的实验方法是生理盐水灌注后4%的多聚甲醛灌注，然后取材，分别10%，20%，30%沉底，液氮速冻，然后就-80℃保存，切片后放置在-20℃，染色的时候就拿来4℃复苏30分钟，室温干燥1小时，pbs洗片，5min/次，三次，共同孵育小鼠和兔的一抗，4℃过两夜，pbs洗三次，每次5分钟，室温共同孵育小鼠和兔的二抗，洗三次，每次5分钟，DAPi染2分钟，pbs清洗10分钟，在镜下看到就是这样的图，完全不知道是怎么回事儿，有没有哪位老师遇到过我这种情况？